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EDC半抗原交联试剂盒
 

产品编号

包装

价格

8070028-E1

6

4280.00

8070028-E2

6

3800.00

8070028-E3

6

4280.00

8070028-E4

6

3800.00

8070028-E5

6

4280.00

8070028-E6

6

3800.00

产品简介

EDC是一个可以与自由羧基或氨基反应的零长度交联剂。EDC首先与羧基发生反应形成O-酰基脲中间体,此中间体能迅速与氨基基团发生反应,形成酰胺键,并释放出异脲副产物。该酰基脲中间产物在水溶液中不稳定,如不能与胺发生反应将迅速水解,使羧基再生,但如能与N-羟基琥珀酰亚胺反应则生成较稳定的中间产物。在EDC的作用下,N-羟基琥珀酰亚胺与半抗原的羧基反应将其生成活性酯。该活化反应在pH 4.5-7.2时最有效。生成的活性酯中间产物在碱性或弱碱性条件下与伯胺反应,形成酰胺共价键,实现双分子的化学交联。活性酯在pH值为7-8时效率最高。为了达到最好的反应效果,通常第一次反应多在pH 5-6的缓冲液中进行,然后再在pH 7-8或以上的缓冲液中与载体分子的胺基反应,最终实现含羧基的小分子半抗原与带有胺基的载体蛋白的化学交联,从而成功实现人工合成完全抗原。

EDC半抗原交联试剂盒(EDC coupling Kit)以EDC为偶联剂,可采用单试剂或双试剂法进行半抗原与载体蛋白的化学交联。操作简单易行,反应效率高,偶联效果稳定可靠。

包装

产品编号

规格

8070028-E1

8070028-E2

8070028-E3

8070028-E4

8070028-E5

8070028-E6

KLH 

10mg

2

--

2

--

2

--

BSA

25mg

2

3

2

3

2

3

OVA

20mg

2

3

2

3

2

3

EDC

5mg

6

6

6

6

6

6

NHS

5mg

--

--

6

6

6

6

超纯水

8ml

1

1

1

1

1

1

  交联缓冲液

8ml

1

1

--

--

--

--

活化液

8ml

--

--

1

1

--

--

活化缓冲液

8ml

--

--

--

--

1

1

偶联缓冲液

8ml

--

--

1

1

1

1

透析缓冲盐

2000ml/

3

3

3

3

3

3

反应杯(含搅拌子)

10ml

1

1

1

1

1

1

透析袋

8.5cmX2

1

1

1

1

1

1

保存

-20℃或以下温度保存。勿反复冻融或于4℃以上久置。

使用说明

本产品可用于小分子化合物及多肽等半抗原与载体蛋白的偶联,也可作为抗肿瘤药物与靶向载体的交联试剂用于靶向药物的研究。

操作流程1(单试剂一步法)

1、取出EDC和载体蛋白平衡到室温;

2、取BSAOVAKLH载体蛋白干粉10mg加入到600ul超纯水中,待完全溶解;

3、取半抗原(含羧基抗原肽)2-5毫克溶于100-400µl交联缓冲液后,加入到载体蛋白溶液中,搅拌混匀。

4、取EDC粉剂5毫克溶于500ul的超纯水中,混匀后立即取100-400µl,搅拌状态下加入到半抗原载体蛋白偶联缓冲液中。

5、室温避光搅拌反应2-6小时主要如出现沉淀,应适量减少EDC的用量。

6、取透析缓冲盐,加入氯化钠18g,定容到2000ml溶解混匀;

7、使用透析、离心超滤或脱盐柱去除未反应的半抗原、交联剂和反应副产物等,

8、收集偶联物部分,置4℃或-20℃保存备用。

操作流程2(双试剂法)

1、取出EDCNHS和载体蛋白平衡到室温;

2、取BSAOVAKLH载体蛋白干粉10mg加入到900ul超纯水中,待完全溶解后,加入900ul偶联缓冲液,搅拌混匀;

3取半抗原5.0mg(含羧基小分子化合物)溶于300µl活化液中,混匀;

4、取NHS干粉5mg溶于250ul活化液中,取150ul加入到半抗原中,溶解混匀;

5EDC干粉 5mg溶于250ul活化液中,混匀后立即取150ul加入到半抗原溶液中,室温避光搅拌反应6-10小时;

6、将半抗原反应液逐滴添加到载体蛋白偶联缓冲液中,在室温避光搅拌反应4-6小时;

7、取透析缓冲盐,加入氯化钠18g,定容到2000ml溶解混匀;

8、装入透析袋对透析缓冲液透析(或使用透析、离心超滤或脱盐柱)去除未反应的半抗原、交联剂和反应副产物等,换液4-6次;

9、收集偶联物部分,置4℃或-20℃保存备用。

操作流程3(双试剂二步法)

1、取出EDCNHS和载体蛋白平衡到室温;

2、取BSAOVAKLH载体蛋白干粉10mg加入到600ul超纯水中,待完全溶解后,加入900ul偶联缓冲液,搅拌混匀;

3取半抗原5.0mg(含羧基小分子化合物或抗原肽)溶于300µl活化缓冲液中,混匀;

4、取NHS干粉5mg ,溶于250ul超纯水中,混匀后立即取出150ul加入到半抗原溶液中;

5EDC干粉 5mg,溶于250ul超纯水中,混匀后立即取150ul加入到半抗原溶液中,室温避光搅拌反应20-30分钟;

6、将半抗原反应液逐滴添加到载体蛋白偶联缓冲液中,在室温避光搅拌反应4-6小时;

7、取透析缓冲盐,加入氯化钠18g,定容到2000ml溶解混匀;

8、装入透析袋对透析缓冲液透析(或使用透析、离心超滤或脱盐柱)去除未反应的半抗原、交联剂和反应副产物等,换液4-6次;

9、收集偶联物部分,置4℃或-20℃保存备用。

参考文献

1Grabarek, Z. and Gergely, J. (1990).  Zero-length crosslinking procedure with the use of active esters.   Anal Biochem 185:131-5.

2Staros, J.V., et al. (1986).  Enhancement by N-hydroxysulfosuccinimide of water-soluble carbodiimide-mediated coupling reactions.  Anal Biochem 156:220-2.

3Timkovich, R. (1977).  Detection of the stable addition of carbodiimide to proteins.  Anal Biochem 79:135-43.

4Sehgal D1, Vijay IK. (1994).  A method for the high efficiency of water-soluble carbodiimide-mediated amidation.  Anal Biochem.  Apr;218(1):87-91.

更新时间:2018-10-10    浏览次数:258次
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